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干貨丨抗體標(biāo)記經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

更新時(shí)間:2022-05-27  |  點(diǎn)擊率:2372

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導(dǎo)讀:

熒光抗體標(biāo)記技術(shù)是將熒光標(biāo)記物以化學(xué)方法與特異性抗體共價(jià)結(jié)合,在抗體-熒光結(jié)合物與對應(yīng)的抗原特異結(jié)合后,通過熒光顯微鏡等儀器設(shè)備觀察熒光標(biāo)記物的信號(hào)情況,從而實(shí)現(xiàn)對待檢物的定位、定性或定量檢測。在實(shí)驗(yàn)過程中,我們經(jīng)常會(huì)遇到如何選擇熒光標(biāo)記物、多重?zé)晒鈾z測時(shí)如何進(jìn)行熒光標(biāo)記物的搭配等問題。為此,小編特意采訪了Bioss抗體標(biāo)記專家,讓我們一起聽聽專家的分享吧~

 

 

 

Q1:市面上的熒光標(biāo)記物很多,如何判斷一個(gè)熒光標(biāo)記物是否適合標(biāo)記抗體呢?

作為標(biāo)記的熒光標(biāo)記物應(yīng)符合以下要求:

 具有能與抗體形成共價(jià)鍵的化學(xué)基團(tuán),且與抗體結(jié)合后不易解離,同時(shí)未結(jié)合的熒光標(biāo)記物及其降解產(chǎn)物易于清除;
 熒光效率高,在與抗體結(jié)合后仍能保持較高的熒光效率;
● 與抗體結(jié)合后不影響抗體原有的生化與免疫性質(zhì);
● 標(biāo)記方法簡單,安全無毒;
● 與抗體結(jié)合穩(wěn)定,終產(chǎn)物易于保存。

 

 

 

Q2:在Bioss實(shí)驗(yàn)室,經(jīng)常用到哪些熒光標(biāo)記物,可以推薦一些嗎?







Bioss實(shí)驗(yàn)室可以提供基于29種標(biāo)記方式的標(biāo)記抗體產(chǎn)品及標(biāo)記服務(wù),比較常用的有:

 小分子熒光素:FITC, Rhodamin
 Cy系列:Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7
● Alexa Fluor系列:
AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750
 熒光蛋白:PE, APC, PerCP
● 熒光串聯(lián)標(biāo)記:PE-Cy, PerCP-Cy等

 

 

 

Q3:以上提到的熒光標(biāo)記物,經(jīng)常會(huì)用于哪些實(shí)驗(yàn)?zāi)兀?/span>

下表匯總了不同種類熒光標(biāo)記物的適用實(shí)驗(yàn)類型,供大家參考

工作簿1.jpg

 

 

 

 

Q4:對于有多重?zé)晒鈾z測需求的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,比如多重免疫熒光檢測和流式細(xì)胞術(shù)等,在做多重?zé)晒馊旧桨冈O(shè)計(jì)時(shí),需要遵循哪些原則?

在Bioss實(shí)驗(yàn)室,我們做多重?zé)晒鈾z測設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí),一般會(huì)遵循以下原則:

● 確認(rèn)檢測設(shè)備的參數(shù):熒光顯微鏡通常是一個(gè)鹵素光源配若干個(gè)濾光片,流式細(xì)胞儀通常是2-3個(gè)激光管配若干個(gè)檢測通道;

 在可選范圍內(nèi)選擇更強(qiáng)的熒光,常用熒光及其強(qiáng)弱程度排序: PE>APC>PE-Cy5>PE-Cy5.5/PerCP-Cy5.5>FITC;  
 細(xì)胞表面蛋白可以選擇PE等熒光蛋白,需要進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)的檢測,盡量選擇小分子熒光素;  
● 對熒光多重染色,熒光素與抗體組合需要考慮目的抗原的含量,樣本中含量低的指標(biāo)優(yōu)先選擇熒光較強(qiáng)的熒光素。如果是分步加入熒光抗體,考慮到熒光的衰減,按照熒光素的強(qiáng)弱排序依次加入。

 

 

 

若有其他關(guān)于標(biāo)記方面的問題,歡迎留言,我們的技術(shù)專家會(huì)及時(shí)與您溝通探討。

 

 

 

 

 

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